概述

　　免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。

　　这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。

　　技术路线

　　1、细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂)裂解细胞

　　2、取少量裂解液以备做input分析，剩余裂解液将相应的抗体加入到细胞裂解液，摇晃孵育过夜

　　3、将预处理过的protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4℃ 缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与protein A琼脂糖珠偶连;

　　4、将琼脂糖珠离心至管底;吸去上清，琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3-4次;最后加入上样缓冲液，沸水煮5分钟;

　　5、Western blotting或质谱仪分析。

　　相关要求(客户提供)：

　　1. 裂解的蛋白或组织(细胞)样本

　　2. IP级一抗(或由我方代购)

　　最终结果包括：

　　1. 实验过程图片

　　2. 实验报告(实验仪器及厂家;实验试剂及厂家批号;实验步骤;实验结果);

　　3、实验记录本

　　4、原始实验图片及数据