转录激活因子在结构上是组件式的(modular)往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成, 其中有DNA结合结构域(DNA binding domain，简称为DB)和转录激活结构域(activation domain，简称为AD)，是转录激活因子发挥功能所必需的。前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游，转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。这两个结合域分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有通过适当的途径在空间上较为接近时，才能呈现完整的GAL4转录因子活性，并可激活上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)的转录。根据这个特性，将编码DNA-BD的基因与已知蛋白质Bait protein的基因构建在同一个表达载体上，在酵母中表达两者的融合蛋白BD-Bait protein。将编码AD的基因和cDNA文库的基因构建在AD-LIBRARY表达载体上。同时将上述两种载体转化改造后的酵母，这种改造后的酵母细胞的基因组中既不能产生GAL4，又不能合成LEU、TRP、HIS、ADE，因此，酵母在缺乏这些营养的培养基上无法正常生长。当上述两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时，功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因HIS、ADE、LACZ、MEL1，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。

　　近年来，为了进一步拓展酵母双杂交系统的应用范围又衍生出酵母单杂交系统、反向酵母双杂交系统、酵母三杂交系统及Sos 恢复系统等。成为了人类获得生物体内蛋白质间作用关系的有效途径。瑞吉因拥有Clontech GAL4-based two-hybrid system 和Stratagene Cytotrap Psos system两套系统，可适用于检测浆蛋白、核蛋白 以及膜蛋白的蛋白质相互作用。

　　技术路线

　　蛋白质两两之间相互作用的实验

　　1、基因克隆的获得及DNA测序检验;

　　2、基因的酵母双杂交载体构建及其DNA测序检验;;

　　3、每个基因克隆的酵母双杂交自激活检验;

　　4、酵母细胞内的相互作用验证

　　蛋白质与文库相互作用的实验

　　1、诱饵基因克隆的获得及DNA测序检验;

　　2、诱饵基因的酵母双杂交载体构建及其DNA测序检验;

　　3、诱饵基因的酵母双杂交自激活检验;

　　4、酵母双杂交文库筛选;

　　5、酵母细胞内的相互作用验证(酵母回转验证);

　　6、阳性克隆DNA序列测定;

　　相关要求(客户提供)：

　　1、 含有诱饵基因片段的质粒或菌株

　　2、用于筛选的文库质粒或菌株

　　最终结果包括：

　　1、构建得到的诱饵质粒;

　　2、自激活及WB检测诱饵基因表达结果;

　　3、筛到的相互作用阳性克隆DNA和菌株实物。

　　4、实验结报告(实验步骤;主要仪器及厂家;主要试剂及厂家批号;实验结果)

　　5、实验记录本

　　6、原始实验结果及数据

　　高效液相色谱

　　原理： 色谱法是一种分离技术，试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 其中的一相固定不动，称为固定相; 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体(气体或液体)，称为流动相。 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。

　　高效液相色谱法是液体为流动相的一种高效色谱分离技术，根据混合物中的各个组成成分在固定相和流动相之间的分配比例的不同，实现成分之间的分离的。已知化合物的70%-80%都可用于液相色谱法进行分析，理论上适用于高沸点、热稳定性差及分子量较大的化合的分析。HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。

　　应用：蛋白质组学研究;寡聚糖和糖蛋白的研究;小分子化合物分析;药物发现和研发;食品和环境样品分析。

　　实验流程：配置标准品溶液 配置待测物质溶液 确定色谱条件 上机检测

　　客户提供：

　　样品体积：>50ul

　　样品浓度：>0.1ug/ul

　　冻干样品：>5ug.

　　提供给客户的实验结果:

　　提供客户服务报告，内容包括分析方法、分析结果、结果分析等

　　HPLC检测实验周期：

　　3工作日