概述

　　噬菌体展示技术(phage displayed technology，PDT)是将多肽或蛋白质的编码基因或目的基因片段克隆入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外壳蛋白融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性，以利于靶分子的识别和结合。肽库与固相上的靶蛋白分子经过一定时间孵育后，洗去未结合的游离噬菌体，然后以竞争受体或酸洗脱下与靶分子结合吸附的噬菌体，洗脱的噬菌体感染宿主细胞后经繁殖扩增，进行下一轮洗脱，经过3轮～5轮的“吸附-洗脱-扩增”后，与靶分子特异结合的噬菌体得到高度富集。然后进行扩增及基因序列测定，推断外源蛋白的氨基酸组成。该技术将基因型与表型、分子结合活性与噬菌体的可扩增性结合在一起，是一种高效的筛选新技术。目前已成功应用于抗原表位分析，单抗筛选，蛋白质功能拮抗多肽或模拟多肽的确定等。在药物筛选、疫苗设计等方面发挥重要作用。

　　技术路线

　　1、将小分子或交联后的小分子包板后，用封闭液进行封闭。

　　2、噬菌体展示文库库进行3轮差减筛选，铺板，获得噬菌体阳性克隆。

　　3、选取筛选得到的噬菌体克隆进行ELISA检测，选择ELISA检测亲和力较高的克隆(P/N>3.0)进行测序。

　　4、采用生物信息学分析测序获得的噬菌体阳性克隆。

　　5、撰写详细的实验报告，交付实验结果。

　　相关要求(客户提供)：

　　1、客户需要提供足够的兴趣蛋白或生物大分子(至少2mg，纯度90%以上)。

　　2、客户需提供用于筛选的特殊组织噬菌体文库(滴度在1 x 108以上)

　　最终结果包括：

　　1、酶联免疫吸附法鉴定的阳性噬菌体与小分子的结合活性

　　2、挑取的噬菌体克隆测序结果

　　3、生物信息学分析测序结果

　　4、筛选得到的噬菌体克隆质粒

　　5、实验报告(实验仪器及厂家;实验试剂及厂家批号;实验步骤;实验结果);

　　6、实验记录本

　　7、原始实验图片