概述
蛋白质乙酰化是在乙酰基转移酶的作用下,在蛋白质赖氨酸残基上添加乙酰基的过程。组蛋白乙酰化多发生在核心组蛋白N-端碱性氨基酸集中区的特定赖氨酸残基,将乙酰辅酶A的乙酰基转移到赖氨酸的sNH3中和掉1个正电荷。组蛋白乙酰化水平是由组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltmnsferse,HATs)和组蛋白去乙酰基转移酶(histone deacetylase,HDACs)共同决定。
组蛋白乙酰化与去乙酰化过程处于动态平衡,是细胞精确控制基因表达,蛋白质活性或生理过程的一种机制。在代谢相关疾病中发挥重要作用。
组蛋白乙酰基转移酶( HAT)活性检测
实验流程:
1. 细胞核抽提物/HAT抽提物制备;
2. 分光光度法/荧光法/试剂盒检测HAT活性;
3. 绘制拟合率曲线(抑制率/活性)。
染色质免疫沉淀技术(ChIP) 方法检测
实验流程:
1. 核小体与DNA交联
2. 分离染色质,超声切割到平均3个核小体长度
3. 用抗乙酰化N―末端组蛋白序列的特异抗体进行免疫沉淀
4. 抽提免疫沉淀染色质中的DNA
5. PCR扩增特定的DNA序列
Western blot 检测
实验流程:
1. 直接用特定乙酰化位点-特异性抗体检测细胞乙酰化水平
2. IP级抗乙酰赖氨酸抗体免疫共沉淀细胞总乙酰化蛋白;H3, H4抗体Western blot检测细胞乙酰化水平
客户提供
1、 研究用细胞或组织样本
2、相应的抗体
瑞吉因提供
1、实验过程图片
2、实验报告(实验仪器及厂家;实验试剂及厂家批号;实验步骤;实验结果);
3、 实验记录本
4、 原始实验图片
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